Haemoglobin হল tissue তে oxygen সরবরাহ করার প্রধান উৎস। Tissue তে oxygen কম সরবরাহ হলে এবং haemoglobin এর পরিমান কমের কারনে tissue নস্ট হয়ে যেতে পারে।
বিভিন্ন anaemia-র কারনে রক্তে haemoglobin এর পরিমাণ কম থাকে। Anaemia-র কারণ সমূহ, যেমন Iron deficiency or Folic acid deficiency, Red blood haemolysis, defective globulin synthesis and structural abnormalities of RBC.
যে সব কারনে রক্তে haemoglobin এর পরিমান বেশী থাকে 1. Polycythaemia vera 2. Congenital cyanotic heart disease 3. Heart stroke 4. Dehydration
Haemoglobin Estimation (Sahli’s Method):
প্রয়োজনীয় যন্ত্রপাতি:
1. Sahli Haemometer
2. N/10 HCl (N/10 হাইড্রোক্লোরিক এসিড)
3. Distilled Water
Sahli Haemometer এ যা যা থাকে:
1. Matching box
2. Haemoglobin pipette
3. Haemoglobin tube
4. Glass stick
5. Dropper
পরীক্ষা পদ্ধতি:
>> Haemometer এর haemoglobin tube এ ২০ দাগ পর্যন্ত N/10 HCl নিতে হবে।
>> Haemoglobin pipette দিয়ে 0.02 ml দাগ পর্যন্ত রক্ত haemoglobin tube এ নিয়ে tube এর N/10 HCl এর সাথে মিশাতে হবে। Fluid এবং blood mix করার জন্য glass stick বা কাঁচের দন্ড ব্যবহার করলে ভাল হয়।
>> মিশানোর পর ৫-১০ মিনিট অপেক্ষা করতে হবে।
>> এবার ড্রপার এর সাহায্যে haemoglobin tube এ ১-২ ফোঁটা করে distilled Water দিয়ে কাঁচ দন্ডের সাহায্যে ভালভাবে mix করতে হবে।
>> যতক্ষণ পর্যন্ত না haemoglobin tube এর মিশ্রণের রং haemoglobin tube এর দুই পাশের হলুদ রং এর দুইটা tube এর রং এর সাথে সামঞ্জস্য না হয়, ততক্ষন ১-২ ফোঁটা করে distilled water দিতে হবে।
>> Haemoglobin tube এর মিশ্রণের রং haemoglobin tube এর দুই পাশের tube এর রং এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হলে বা এক হলে, Haemoglobin tube এর গায়ে লিখা দেখে report দিতে হবে।
>> Haemoglobin tube এ মিশ্রণের রং যত লিখায় এসে পাশের tube এর রং এর সাথে এক হয়ে যায়, ঐ দাগে লিখা সংখ্যাই রোগীর haemoglobin এর পরিমাণ।
>> Haemoglobin tube এর দুই পাশে দুই ধরণের দাগ কাঁটা থাকে। একপাশে gm/dl এবং অন্যপাশে (%) হিসাব দাগ কাঁটা থাকে।
Haemoglobin এর Normal Value:
Male (পুরুষ) : 14.0-18.0 gm / dl
Female (মহিলা) : 12.0-16.0gm/dl
Cyanmethaemoglobin method
Haemoglobin test এর জন্য Cyanmethaemoglobin method বা Haemoglobin cyanide photometric method সবচেয়ে নির্ভূল আদর্শ পদ্ধতি । এই পদ্ধতিতে Drabking diluting fluid ব্যবহার করতে হয়।
Drabking Diluting Fluid প্রস্তুতি :
Potassium Ferricyanide (k3Fe(CN)6) —– 0.40g
Potassium Cyanide (KCN) —– 0.10g
Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) —– 0.28g
Sterox SE(or equivalent) —– 1ml
Distilled water —– 2000 ml
বর্তমানে বাজারে বিভিন্ন company-র তৈরী (ready for use) বিভিন্ন ধরনের solution পাওয়া যায় যার সাহায্যে সহজে Cyanmethaemoglobin method এ haemoglobin test করা সম্ভব। এখানে দুইটি Company র Reagent ও পরীক্ষা সম্পর্কে আলোচনা করা হলো।
1.Human GmbH, Germany
Reagent : Haemoglobin liquicolor
Origin : Human GmbH. Germany
Filter : 530 nm (for colorimeter) 546nm (for analyzer)
Contents :
- RGT A 10 x 25 ml, reagent concentrate A
- RGT B 10 × 25 ml, reagent concentrate B
Working reagent preparation:
>> একটি 500ml dark glass reagent bottle এ এক বোতল RGT A এবং এক বোতল RGT B নিতে হবে।
>> ভালভাবে মিশাতে হবে।
>> এর সাথে 450ml distilled water mix করে working reagent তৈরী করতে হবে।
Reagent stability:
Working reagent তৈরীর পর এক বছর পর্যন্ত রুম তাপমাত্রায় ভাল থাকে।
Specimen : Whole blood.
পরীক্ষা পদ্ধতিঃ
| Blank | Sample বা Test | |
| Working Reagent | 1000 micro l বা 1 ml | 5000 micro l বা 5 ml |
| Whole blood | X | 20 micro l |
>> ভালভাবে mix করতে হবে ।
>> রুম তাপমাত্রায় ৩ মিনিট রাখতে হবে।
>> Reagent blank দিয়ে zero adjust করতে হবে।
>> Sample এর OD নির্নয় করতে হবে।
Calculation:
Conc. of heamoglobin (g/dl) = Factor x OD of sample
Conc. of heamoglobin (g/dl)=OD of sample x 36.8 (546 nm filter এর ক্ষেত্রে)
530nm filter এর ক্ষেত্রে calibration chart দেখে report দিতে হবে।
Note: 16gm/dl heamoglobin = 100%
2.Randox, UK
Reagent : Haemoglobin
Origin : Randox. UK
Wevelength/Filter : 530nm (for colorimeter), 546nm (for analyzer).
Reagent preparation:
>> একটি dark glass bottle এ 900ml distilled water নিতে হবে।
>> এর সাথে 100ml (1 bottle) heamoglobin reagent mix করে working reagent তৈরী করতে হবে।
Reagent stability:
2-8°C তাপমাত্রায় expiry date পর্যন্ত ।
Working reagent তৈরীর পর 15-25°C তাপমাত্রায় ৬ মাস ভাল থাকে।
Sample : Whole blood
পরীক্ষা পদ্ধতিঃ
| Blank | Sample | |
| Working reagent | X | 5 ml |
| Distilled water | 1 ml | X |
| Whole blood | X | 20 micro l |
>> ভালভাবে mix করতে হবে।
>> ৩ মিনিট রুম তাপমাত্রায় রাখতে হবে।
>> Blank দিয়ে zero adjust করে sample এর OD নির্ণয় করতে হবে।
Calculation:
Heamoglobin concentration: OD of sample x 36.77 (g/dl)
Reference values of haemoglobin:
Men : 14-18g/dl
Women : 12-16 g/dl
New-born : 16-25g/dl
Infants : 10-15g/dl
Young children : 11-14 g/dl
Children : 12-16 g/dl