Haematology

Haematology : 

Haematology is study of blood cells :  

Blood :

Blood is a body fluid that delivers necessary substances such as nutrients and oxygen to the cells and transports metabolic waste products away from those same cells.

Composition of Blood :  

Blood is composed of two main components : 

1. Plasma.
2. Blood cells.

Plasma: 

Plasma constitutes 55% of blood fluid.

• Water (92% by volume).
• Solid :
  • Inorganic : Sodium, Potassium, Magnesium, Calcium, Iron.
  • Organic : Proteins- Serum Albumin, Globulin, Fibrinogen,Prothrombin
  • Non protein nitrogenous substance : Urea, Uric acid, Ammonia, Amino acid, Creatinine.
  • Fat : Neutral fat, Phospholipid, Cholesterol.
  • Carbohydrate : Glucose
  • Others : Antibody. 

Blood cells :

The blood cells are of three types-

1. Erythrocytes – RBC 
2. Thrombocytes – Platelet 
3. Leukocytes – WBC 

Functions of Blood : 

• Transporting oxygen and nutrients to the cells.
• Removing carbon dioxide and waste products from the cells.
• Defend the body against microbes and other foreign materials.
• Helping to regulate body temperature.
• Promote blood clotting to stop haemorrhage.

1.Erythrocytes RBC : 

These are circular by concave non nucleated disc with a diameter of 7- 7.5 micrometre 

Normal count  : Male : 4.5-6.5 million/cumm

: Female : 4.5- 5 million/cumm

Life span : About 120 days 

Function : Contain haemoglobin which carries O₂ from

  lungs to the tissue and CO₂ from lungs.

Or

Functions of RBC : 1) Respiratory function : RBC র অভ্যন্তরে উপস্থিত  hemoglobin, Lungs থেকে tissue তে oxygen বহন করে এবং tissue থেকে Lungs এ carbon dioxide বহন করে। 2) Acid balance কে maintain করে। 3) Intracellular ion balance কে maintain করে। 4) Blood-এর viscosity কে maintain করে  N.B. : যে condition  এ RBC- র  Total count, normal count অপেক্ষা বেশি হয়ে যায়, সেই condition  কে polycythemia  বলে।

2.Thrombocytes platelet : 

These are non nucleated discs with a diameter of 2-4 micrometres. These are derived from the cytoplasm of Megakaryocytes in red bone marrow.

Normal count : 200000-350000

Life span : 8 to 11 days 

Function : Promote blood clotting to stop haemorrhage. 

3.Leukocytes WBC :  

These are five different types 

1. Neutrophil 40-75% 
2. Eosinophil 1 -6% 
3. Basophil   0-1%
4. Lymphocytes 20-50%
5. Monocyte 2-8%

N.B. : Monocyte is the largest WBC.

Total count of WBC : 4000-11000 /cumm

Lifespan : Few hours to few days 

Function : Defend the body against microbes and other foreign materials. 

Difference between RBC and WBC : 

RBC	WBC
Size : Smaller	Size : Larger
Nucleus : Absent	Nucleus : Present
Colour : Red	Colour : Colourless
Haemoglobin : Present	Haemoglobin : Absent
Life span :120 days	Life span : Few hour to few days
Function : Mainly transport of Oxygen and Carbon dioxide	Function : Phagocytosis and immunity

Some Important Clinical Terms of Haematology : 

Leukocytosis : 

It is an increase in total WBC count above 11,000 / cumm of blood.

Causes : 

1. Physical causes : Newborn, infant, physical exercise, after food intake, pregnancy. 
2. Pathological causes : Pyogenic infection, boil, abscess, appendicitis, haemorrhage, infarction, burn, acute rheumatic fever, malignant neoplasm.

Leukopenia :

It is the decrease in the total WBC count below 4000 /cumm of blood.

Causes : 

• Infection – Typhoid fever, paraTyphoid fever, influenza, measles, malaria, kala-azar.
• Aplastic anaemia.
• Cytotoxic drugs – Chloramphenicol 
• Starvation, malnutrition. 

Neutrophilia :

It is the increase in the number of neutrophils in the peripheral blood above normal level.

Causes : 

1. Physiological cause : Newborn, infant, physical exercise, pregnancy.
2. Pathological cause : Acute infection, tonsillitis, pneumonia, chicken pox, acute rheumatic fever, burn, acute haemorrhage, myocardial infarction.

Neutropenia : 

It is the decrease in the number of neutrophils in the peripheral blood below normal level.

Causes:  

• Infection – Typhoid fever, paratyphoid fever, measles, influenza.
• Aplastic anaemia. 
• Drugs – Chloramphenicol, aspirin.
• Radiation.

Eosinophilia : 

It is an increase in the number of eosinophils in the peripheral blood above normal level. 

Causes : 

• Allergic reaction – Bronchial asthma, Urticaria, 
• Parasitic infection – Hookworm, filariasis.
• Skin disease – Psoriasis 
• Hodgkin’s disease.
• Drugs – penicillin 

Thrombocytosis : 

It is the increase in platelet count above normal level.

Causes : 

• Polycythemia Vera. 
• Chronic myeloid leukaemia.
• Iron deficiency anaemia. 
• Chronic infection. 
• Acute haemorrhage.

Thrombocytopenia : 

It is the decrease in platelet count below normal level

Causes : 

• Idiopathic thrombocytopenic purpura.
• Aplastic anaemia.
• Acute leukaemia. 
• Cytotoxic drug. 
• Radiation.

Reticulocytosis: 

An increase in the number of reticulocytes in the blood is known as reticulocytosis. 

Causes : 

• Acute blood loss.
• Chronic hemolytic anaemia. 
• Disorder of bone marrow. 
• Leukaemia. 
• Secondary deposit in malignancy. 

Pancytopenia : 

It is the state where all the three formed elements of blood are reduced i.e   anaemia, leukopenia and thrombocytopenia. 

Causes :

• Aplastic anaemia.
• Megaloblastic anaemia.
• Radio therapy. 
• Acute leukaemia. 
• Carcinoma of bones.

ESR (Erythrocyte Sedimentation Rate) : 

Two methods 

1. Westergren method 
2. Wintrobe’s method 

Clinical practices  এ Westergren method অনুসরণ করা হয়।

Anticoagulant হিসেবে 3.8% sodium citrate ব্যবহার করা হয়,কারণ 3.8% sodium nitrate, RBC-র Shape ও size এর কোন পরিবর্তন ঘটায় না। সুতরাং সঠিক রেজাল্ট পাওয়া যায়। 

Westergren method এ Anticoagulant এবং Blood এর অনুপাত  1:4

RBC Sediment পড়ে, কারন-RBC এর Specific gravity, Plasma এর Specific gravity অপেক্ষা বেশি। এছাড়াও RBC এর Rouleaux formation এর কারণেও Sediment পড়ে। 

Rouleaux formation (রুলো ফরমেশন):

It is the piling of a red cell onto another like the stack of coins. 

Normal value of ESR (Westergren method) :

Male : 0-10 mm in 1st hour

Female : 0-20 mm in 1st hour

Purpose /Objective /Indication  of ESR :

1. রোগ  /Disease এর Prognosis দেখার জন্য ।
2. কোন কোন Chronic inflammatory disease নির্ণয়/diagnosis করার জন্য।
3. কোন কোন Drug এর Therapeutic effect দেখার জন্য।

Causes of High ESR : 

• Tuberculosis 
• Acute rheumatic fever 
• Acute Myocardial Infarction  
• Rheumatoid arthritis 
• Multiple myeloma  
• Malignant disease 
• Anaemia 

Causes of low ESR : 

• Polycythemia Vera 
• Spherocytosis 
• Sickle Cell anaemia 
• Congestive cardiac failure 
• Hypofibrinogenaemia.

Preparation of Blood Film : 

Two types of blood film

1. Thin Blood film : Haematological study, cell count and study of blood cell morphology (Always used).
2. Thick Blood Film : To detect malarial parasite (Rare used)

Preparation of thin blood film :

Slide method :

Glass Slide এর উপর এক ফোঁটা Blood Spread(30⁰-45⁰ angle)করার মাধ্যমে blood এর thin film প্রস্তুত করা যায়। 

Purpose : Blood এর thin film এর সাহায্য WBC-র differential count, Platelet count, Reticulocyte count এবং RBC-র morphology study করা যায় ।

Criteria of an ideal thin blood film : 

• Uniformly thick.
• Has a single tail.
• Does not extend up to the edge of the slide. 
• White cell are uniformly distributed. 
• The film should be properly stained.

Preparation of thick film :

একটি Slide -এ, রক্তের  একটি বড় ফোটা স্থাপন করা হয়। এরপর একটি needle অথবা আলপিনের head দিয়ে রক্তের ফোটা টিকে ১/২” square – এ spread করা হয়। Film- টিকে horizontal position – এ শুকানো হয় ও একটি petri dish দিয়ে ঢেকে দেওয়া হয়।

Leishman’s stain করার পদ্ধতি : 

• প্রথমে Slide এর উপর কয়েক Drops Leishman’s stain solution দিয়ে সম্পূর্ণ Film টিকে ঢেকে দেই এবং ০১ থেকে ০২ মিনিট অপেক্ষা করি।(খেয়াল রাখতে হবে Slide টি যেন শুকিয়ে না যায়) 
• এরপর Slide এর উপর যতটুকু Staining solution দেয়া হয়েছে এর দ্বিগুণ (Double) পরিমান Deionized Distilled Water দেই এবং Glass pipette এর সাহায্যে ফুঁ দিয়ে ভালভাবে মিশিয়ে নেই।
•  Room temperature এ ৮-১০ মিনিট রেখে দেই (Staining solution এর Quality এর ভিত্তিতে সময়ের কিছুটা পার্থক্য হতে পারে)।
• Slide টিকে Deionized distilled Water দিয়ে ভালোভাবে ধুয়ে নেই এবং বাতাসে শুকাই।
• শুকানোর পর Slide টি কে Microscope এ দেখতে হবে।

Slide ভালোভাবে Stain না হওয়ার কারণসমূহ :  

• Improper preparation of the slide.
• Incorrect staining technique.
• Old or contaminated stain.
• Incorrect pH : Slide stain দেয়ার পর stain এর উপর যে Distilled Water দেওয়া হবে তার pH 7.0 থেকে 7.4 এর মধ্যে না হলে।

Bleeding Time : 

Lancet অথবা  needle দিয়ে finger tip অথবা earlobe এ  prick করলে সেখান থেকে bleeding হবে। prick করার সময় থেকে অর্থাৎ bleeding শুরু হওয়ার সময় থেকে bleeding বন্ধ হওয়ার সময়টুকু কে bleeding time বলা হয় (the time of interval between the start of bleeding to the stoppage of bleeding is known as bleeding time)

Methods of determination of bleeding time :

Two(2) methods :

1. Duke’s method
2. Ivy’s method

Normal value of bleeding time : 

Ivy’s method : 2-7 minutes

Template method : 2.5 – 9.5 minutes

Condition in which bleeding is prolonged:

• Thrombocytopenic purpura,
• Functional platelet defects e.g uraemia, cirrhosis
• Drugs : aspirin

Clotting Time/Coagulation Time (CT) :

Coagulation time is a measure of how long it takes for blood to clot. (Body তে রক্ত জমাট বাধার সময় নির্ণয় করাকে Clotting Time বলে)।

Methods of determination of Clotting time:

1. Capillary tube method
2. Automated method

Normal value of Clotting time : 

• Capillary tube method: 2-8 minutes
• Automated method: 10-12 seconds

Capillary Tube method : 

পরীক্ষা করতে যা লাগবে 

1. Capillary tube
2. Lancet
3. Stop Watch
4. Spirit / Alcohol

Procedure : 

• প্রথমে রক্ত নেওয়ার স্থান Spirit দিয়ে পরিষ্কার করে নেই।
• Lancet দিয়ে নির্ধারিত স্থান Prick করি।
• রক্ত বের হতে থাকলে প্রথম one drop blood  ফেলে দিয়ে তারপর থেকে Blood Capillary tube এ নিতে হবে।
• কমপক্ষে তিন থেকে চারটি Capillary tube এ রক্ত নিতে হবে এবং সাথে সাথে Stopwatch চালু করতে হবে।
• দুই মিনিট পর একটা Blood ভর্তি Capillary tube এর এক প্রান্ত ছোট টুকরা করে ভাঙতে হবে এবং দেখতে হবে রক্ত Capillary tube এর ভেতর জমাট হয়েছে কিনা।
• যতক্ষণ পর্যন্ত জমাট না বাধে ততক্ষণ প্রতি ৩০ সেকেন্ড অন্তর অন্তর Capillary tube ভাঙতে হবে। 

Abnormal values : যে যে কারণে Clotting time বেশি হয় –

• Liver disease.
• Vitamin K deficiency.
• Severe deficiency of coagulation factors.
• Haemophilia.
• Medications such as heparin or warfarin.

Haemoglobin electrophoresis : 

Haemoglobin electrophoresis is a laboratory test that separates the different types of haemoglobin in the blood. 

Methods of Haemoglobin electrophoresis : 

There are two main methods of haemoglobin electrophoresis:

• Native electrophoresis.
• Isoelectric focusing.

Indication of Haemoglobin electrophoresis : 

• Sickle cell anaemia
• Thalassemia

• Haemoglobin C disease
• Haemoglobin SC disease

HbA1C : 

HbA1c, also known as glycated haemoglobin, is a blood test that measures the average amount of sugar (glucose) that has attached to haemoglobin in the red blood cells over the past 2 to 3 months.

Methods of HbA1c : 

There are two main methods for measuring HbA1c:

• High-performance liquid chromatography (HPLC) 
• Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Normal Values of HbA1c :

 HbA1C (Glycated Haemoglobin) : 4.0-6.1 % of total Haemoglobin.

Indication of HbA1c : 

• Diagnose diabetes
• Screen for diabetes
• Monitor diabetes control