Filarial worm এক ধরনের tissue nematodes যার বৈজ্ঞানিক নাম Wuchereria bancrofti. Adult filarial worm গুলো সাধারণত মানবদেহের lymphatic system এ থকে। Filarial worm এর immature first stage larva কে microfilaria বলা হয়। এই microfilaria blood এ এবং শরীরের বিভিন্ন tissue তে থাকে। মশা আক্রান্ত রোগী থেকে অন্যের দেহে এই parasite ছড়ায়।
Blood microfilaria-র উপস্থিতি নির্ণয়ের পদ্ধতি:
Lyzed capillary blood technique
>> Microfilaria-র উপস্থিতি নির্ণয়ের জন্য mid night এ (10PM-4AM) blood collection করতে হবে।
>> রাত ১টায় blood collection করা উত্তম। ।
>> একটি conical centrifuge tube এ 1 ml saponin saline lysis solution নিতে হবে।
>> Patient এর ear lobe থেকে lancet এর সাহায্যে prick করে 100ul blood নিয়ে conical centrifuge tube এর saponin saline lysis solution এর সাথে ধীরে ধীরে mix করতে হবে।
>> RBC ভেঙ্গে দেয়ার জন্য ২মিনিট অপেক্ষা করতে হবে।
>> Test tube টি 5 minutes slow medium speed এ centrifuge করতে হবে।
>> Micropipette বা pasteur pipette এর সাহায্যে সাবধানে test tube এর supernatant (উপরের জলীয় অংশ) ফেলে দিতে হবে।
>> এবার test tube এর sediment একটা পরিষ্কার microscopic slide এর মাঝখানে নিতে হবে। এর সাথে one drop methylene blue saline নিতে হবে।
>> এর উপর একটি coverslip নিয়ে microscope এর হবে। 10x objective এ দেখতে হবে।
>> এই Preparation এ microfilariae পাওয়া গেলে সবগুলো microfilariae count করতে হবে।
>> এই preparation এ পাওয়া microfilariae-র মোট সংখ্যাকে ১০দিয়ে গুণ করলে যা হবে তাই প্রতি ml blood এ microfilariae-র প্রকৃত সংখ্যা বা microfilariae/ml blood.
(Saponin saline solution না পাওয়া গেলে এর পরিবর্তে 1ml clean water দিয়েও কাজ করা যায়। এক্ষেত্রে blood + water mix করার পর RBC নষ্ট করে দেয়ার জন্য 10 minutes অপেক্ষা করতে হবে।)
Saponin saline solution (1%) প্রস্তুতি:
Saponin – – – – – 1g
Normal saline – – – – -100ml
Methylene blue-saline reagent প্রস্তুতি:
Methylene blue – – – – – 1g
Normal saline – – – – – 100ml
Thick stain smear for microfilaria:
>> Midnight এ ear lobe থেকে 20μl blood নিয়ে একটি thick film তৈরি করতে হবে।
>> Film শুকাতে হবে (air dry)
>> Giemsa stain দিয়ে film stain করতে হবে। (malarial parasite এর film যে পদ্ধতিতে stain করা হয় একই পদ্ধতিতে।)
>> Stain করার পর microfilariae পাওয়া যায় তাহলে সম্পূর্ণ film এ microfilariae count করতে হবে।
>> সম্পুর্ণ film এর microfilariae-র সংখ্যাকে ৫০ দিয়ে শুন দিয়ে যা হবে তাই প্রতি ml blood এ microfilariaeর সংখ্যা বা microfilariae/ml blood.