Hepatitis virus detection করার পদ্ধতি
Hepatitis virus সমূহের নাম নিম্নে দেয়া হল:
1. Hepatitis A virus – HAV
2. Hepatitis B virus – HBV
3. Hepatitis C virus – HCV
4 Hepatitis D virus – HDV
5. Hepatitis E virus – HEV
Hepatitis virus detection করার পদ্ধতি সমূহ:
Hepatitis virus সমূহকে detection (নির্ণয়) করা হয় রক্তে উপস্থিত বিভিন্ন প্রকার Serological marker এর মাধ্যমে। এদেরকে একত্রে Hepatitis panel বলে।
যেমন :
Hepatitis panel নিম্নরূপ:
1.Anti HAV
2. HBsAg, HBeAg, Anti HBs, Anti HBc, Anti HBe.
3. Anti HCV
4. Anti HEV IgG / IgM ইত্যাদি
Hepatitis panel নির্ণয় করার তিনটি পদ্ধতি প্রচলিত আছে। যেমন:
1. Latex বা slide agglutination method। উদাহরণ HBsAg latex.
2. Immunochromatographic Test (ICT)। উদাহরণ: ICT for HBsAg, HBeAg, Anti HBc, Anti HCV ইত্যাদি।
3. ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)। উদাহরণ : HBsAg – ELISA, Anti HEV, IgG ELISA, Anti HEV IgM ELISA ইত্যাদি
Immunochromatographic test (ICT):
Serological marker যেমন HBsAg (Hepatitis B surface antigen), bacteria বা virus এর specific antibodies (IgG, IgM) যদি blood, serum, plasma তে বিদ্যমান থাকে, তবে এ জাতীয় marker সমূহকে Immunochromatographic test এর সাহায্যে সহজে detection করা সম্ভব। ইহা rapid, simple immunoassay অর্থাৎ কোন specimen এ bacteria, virus বা এদের marker কে আমরা অল্প সময়ে (10 থেকে 20 মিনিটে) এবং সহজে চিহ্নিত করতে পারি।
ICT র মুলনীতি বুঝানোর সুবিধার্থে HBsAg marker উদাহরণ স্বরূপ আলোচনা করা হল।
Hepatitis B surface antigen (HBsAg) হলো hepatitis B virus এর marker যাহা আক্রান্ত ব্যক্তির রক্তে আক্রান্ত হওয়ার ১ থেকে ২ সপ্তাহের মধ্যে উৎপন্ন হয়। এই marker কে rapid, one step ICT এর মাধ্যমে সহজে নির্ণয় করা যায়। এই marker detection হলে আমরা বলব ঐ ব্যক্তি hepatitis B virus (HBV) দ্বারা আক্রান্ত।
ICT এর মূল নীতি (HBsAg-র ক্ষেত্রে):
>> ইহা এক ধরনের colloidal gold immunoassay বা modified sandwich ELISA, যাহা human serum বা plasma তে বিদ্যমান HBsAg detect (নির্ণয়) করে।
>> প্রথমে sample (serum বা plasma) strip বা device এর sample pad এর উপরে উপস্থিত monoclonal antibody (against HBsAg) Colloidal gold conjugate এর সঙ্গে বিক্রিয়া করে/ জোড়া লাগে এবং উৎপন্ন এরপ immunocomplex, capillary action এর মাধ্যমে membrane বরাবর migrate করে control region এ একটি control band এবং test region এ উপস্থিত immobilised monoclonal anti HBsAg-এর সঙ্গে বিক্রিয়া করে।
>> যদি sample এ HBsAg থাকে, তবে membrane এর উপরে এই point এ একটি test line বা band উৎপন্ন হবে।
>> পক্ষান্তরে, এই antigen, sample এ না থাকলে test region এ কোন band বা line উৎপন্ন হবে না।
>> Control region এ band বা line থাকলে এবং test region এ band বা line না থাকলে, ইহাকে আমরা negative result হিসাবে গন্য করি।
>> Control এবং test region এ band বা line থাকলে, আমরা positive result হিসাবে গন্য করি।
>> লক্ষ্য রাখতে হবে যেন control region এ অবশ্যই band বা line উৎপন্ন হয়, যা কিনা strip এর কার্যকারিতা নিশ্চিত করে।
>> ইহাতে excessive immunocomplex অথবা unreacted colloidal gold conjugate control region অতিক্রম (migrate) করবে এবং membrane এ control area তে উপস্থিত anti-mouse IgG antibodies এর সঙ্গে সংযুক্ত হয়ে control line উৎপন্ন করে, যাহা test result valid কিনা নির্দেশ দেয়।
>> সংক্ষেপে বলা যায় device বা strip এ control line ও test line দেখা গেলে Result: positive.
>> শুধু control line দেখা গেলে – Result: negative.
>> No control line- result invalid, পুনরায় নতুন আঙ্গিকে test টি করতে হবে।
Serology test এর Positive / Negative control:
HBsAg latex, pregnancy latex, RA/RF test, C-reactive protein, VDRL ইত্যাদি reagent box এর মধ্যে reagent vial ছাড়াও আরও ২টি vial থাকে। একটি vial এ লিখা থাকে positive control এবং অন্য vial এ negative control.
HBsAg latex reagent এর control এর ব্যবহার:
>> একটি HBsAg slide a one drop HBsAg latex reagent এর সাথে one drop HBsAg positive control নিয়ে mix করে lab. Rotator এ 100rpm এ 5 মিনিট ঘুরালে agglutination হবে বা ফলাফল positive হবে।
>> আবার ঠিক একই ভাবে একটি HBsAg-slide এ one drop HBsAg latex reagent এর সাথে one drop HBsAg negative control নিয়ে mix করে 5 মিনিট 100rpm এ ঘুরালে কোন agglutination হবে না অর্থাৎ ফলাফল negative হবে।
>> ঠিক একই পদ্ধতিতে VDRL reagent এর সাথে VDRL এর positive control দিয়ে test করলে agglutination হবে বা result reactive হবে এবং VDRL এর reagent এর সাথে VDRL এর negative control দিয়ে test করলে result non reactive হবে অর্থাৎ agglutination হবে না।
যে সব reagent এর সাথে positive control এবং negative control থাকে সে সব reagent ব্যবহারের পূর্বে একবার:
>> One drop reagent + one drop positive control
>> One drop reagent + one drop negative control mix করে নির্ধারিত সময় Lab. rotator এ ঘুরানোর পর ফলাফল পর্যবেক্ষণ করতে হবে।
>> Positive control + reagent positive এর ফলাফল Positive হবে।
>> Negative control + reagent negative এর ফলাফল Negative হবে।
Reagent দিয়ে কাজ শুরুর পূর্বে positive এবং negative control ব্যবহার করলে reagent এর গুনাগুণ ঠিক আছে কিনা, reagent দিয়ে positive agglutination কেমন হয়, reagent দিয়ে negative result কেমন দেখায় ইত্যাদি সম্পর্কে ধারনা লাভ করা যায়।